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              值得收藏的干貨 - 超微量分光光度計性能檢查的常用方法

              超微量分光光度計作為常用的核酸、蛋白等生物大分子的定量和表征工具,廣泛應用于生命科學和生物制藥等領域,用戶僅需微量樣品即可快速獲得濃度及吸光度結果。然而在日常使用中,一些用戶會對測量結果有疑慮,尤其是當測量結果與預估的結果出現較大差異,或與使用其他方法的定量結果有差異時,用戶往往會懷疑設備出現問題或故障。

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              實際上,作為精密的分析儀器,設備出現問題的幾率并不高,尤其是當設備正常使用和日常維護時,更多的問題可能由外部因素導致,如樣品的均質、顆粒物或氣泡干擾等。本文提所列的方法可幫助您快速判定設備的狀態,以便您放心、高效的進行測量工作。

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              標準品測量

              常用的標準品可使用BSA或核酸標準品,可從各試劑廠家購買,或使用如BCA定量試劑盒,QUBIT核酸定量試劑盒中的標準品。請注意標準品一定要在效期之內,且保存得當(通常低溫)。也可以使用設備廠家提供的小分子化合物標準品,如Implen提供的PHP標準品。標準品是有等級區分的,通常附帶有檢定證書的標準品,標稱濃度會更準確。

                  特別指出的是,使用未知濃度的樣品,來評估不同設備的測量結果,并以其中一臺作為基準,判定另外一臺的準確性,是完全錯誤的。

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              重復性測量

              在缺乏標準品,或標準品由于保存不當狀態已存疑時,可使用未知濃度樣品做重復性測試。這可以判斷設備的穩定性,以排除一些潛在問題,如樣品臺損壞、樣品的非均質,成分干擾等。雖然不能確定準確性誤差,但重復性很好的設備,很大幾率是沒有大問題的。當然,這需要結合您的允差要求,綜合考量。

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              梯度稀釋測量

              使用已知濃度或未知濃度的樣品,均可進行梯度稀釋測量,以驗證設備的線性穩定性。使用設備的標準曲線功能可便捷地完成此項測試,并給出線性回歸。當梯度稀釋的R2趨近于1,設備的線性完全可滿足廣泛的動態范圍內的測量要求,同時也可反映設備的良好狀態。需要注意的是,梯度稀釋時一定要選擇定期校準過的,準確性好的移液器,且正確操作。

              基線穩定性測量

              光源和CCD檢測器,作為設備的核心組件,其穩定性對于設備而言是非常重要的,而基線測量可以很好地反映這些部件的狀態。使用水(或空氣)作為空白,并且用水(或空氣)作為樣品,做多次重復測量,如果吸光值的漂移很小,通??煞从吃O備的光學系統組件狀態正常。

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              光譜曲線

              正常的核酸和蛋白質樣品,或者其他化合物樣品,都具有典型的吸收曲線。異常的曲線往往說明樣品的問題,或設備光路系統可能存在的問題。光譜曲線可作為測量結果可靠性的參考,且多數設備可根據曲線給出樣品潛在問題的警告。

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               通過以上測試方法,可以評估設備的狀態和試驗數據的可靠性。實際工作中,由于設備本身原因導致的測量不準確畢竟是占少數的。規范操作,正確使用應是用戶更應關切的核心。后續,我們將為您解讀關于超微量測量樣品時的一些常見誤區,希望您持續關注,更加愜意地使用您的Nanophotometer?。


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